Estudio proteomico diferencial entre liquidos pleurales secundarios a cáncer de pulmón versus mesotelioma / Differential proteomic study between pleural fluid secondary to lung cancer versus mesothelioma

Objetivo: Encontrar perfiles proteicos en líquido pleural que diferencien derrames pleurales secundarios a cáncer de pulmón (CP) versus mesotelioma pleural maligno (MPM).Metodología: Recogimos líquidos pleurales de 60 pacientes de tres grupos diferentes: MPM (N = 20), CP (N = 20) y derrames pleurales benignos (N = 20). Realizamos un análisis con proteómica diferencial con ITRAQ 4 plex (Applied Biosystem). Realizamos la identificación y cuantificación relativa de las proteínas con el programa Proteome Discoverer 1.4 (Termofisher Scientific). Construimos diagramas de Venn con las proteínas sobre/infra-expresadas en cada grupo. Realizamos una validación interna/externa mediante ELISA (Myobiosorce) añadiendo 25 muestras de CP y 14 de MPM.Resultados: Encontramos sobreexpresión de Pi3K en los derrames pleurales neoplásicos (16,86 +/- 25,83 ng/ml en CP; 20,66 +/- 17,26 ng/ml en MPM vs 5,92 +/- 0,99 ng/ml en controles). Hubo sobreexpresión de SPRM en MPM (30.702 +/- 30.310,53 ng/ml en el grupo MPM vs 10.404 +/- 10.157,72 ng/ml en el grupo CP vs 8.498 + /- 3.437,18 ng/ml en controles). Existió sobreexpresión de RhoB en CP (4,46 +/- 1,65 mg/ml en CP vs 1,65 +/- 2,65 mg/ml en MPM vs 0,92 +/- 1,6 mg/ml en controles). También encontramos sobreexpresión de PDGFR-alfa en derrames pleurales benignos (74,12 +/- 22,57 ng/ml en controles vs 43,05 +/- 23,96 ng/ml en CP vs 36,12 +/- 21,51 ng/ml en MPM).Conclusión: Existe un perfil diferencial proteico entre los derrames secundarios a CP (sobreexpresión de RhoB) y a MPM (sobrexpresión de SPRM). La sobrexpresión de Pi3K indica asociación a derrames pleurales malignos y la de PDGFR-alfa a derrames benignos. (AU)

Objetivo: Find protein profiles in pleural fluid that differentiate pleural effusions secondary to lung cancer (LC) versus malignant pleural mesothelioma (MPM).Metodología: We collected pleural fluids from 60 patients from three different groups: MPM (N = 20), CP (N = 20), and benign pleural effusions (N = 20). We performed differential proteomics analysis with ITRAQ 4 plex (Applied Biosystem). We performed the identification and relative quantification of the proteins with the Proteome Discoverer 1.4 program (Termofisher Scientific). We built Venn diagrams with the over/under-expressed proteins in each group. We performed an internal/external validation using ELISA (Myobiosorce) adding 25 CP and 14 MPM samples.Resultados: We found Pi3K overexpression in neoplastic pleural effusions (16.86 +/- 25.83 ng/ml in PC; 20.66 +/- 17.26 ng/ml in MPM vs 5.92 +/- 0.99 ng/ml in controls). There was overexpression of SPRM in MPM (30,702 +/- 30,310.53 ng/ml in the MPM group vs 10,404 +/- 10,157.72 ng/ml in the CP group vs 8,498 +/- 3,437.18 ng/ml in controls). There was overexpression of RhoB in CP (4.46 +/- 1.65 mg/ml in CP vs 1.65 +/- 2.65 mg/ml in MPM vs 0.92 +/- 1.6 mg/ml in controls). We also found overexpression of PDGFR-alpha in benign pleural effusions (74.12 +/- 22.57 ng/ml in controls vs 43.05 +/- 23.96 ng/ml in PC vs 36.12 +/- 21.51 ng/ml in MPM ).Conclusión: There is a differential protein profile between effusions secondary to CP (RhoB overexpression) and MPM (SPRM overexpression). Pi3K overexpression indicates association with malignant pleural effusions and PDGFR-alpha overexpression with benign effusions. (AU)

Cellular mechanisms involved in the pathogenesis of airway remodeling in chronic lung disease.

Background: Airway epithelial cells and lung fibroblasts play an important role in the development of chronic lung disease, but the exact mechanisms responsible have not been clarified. Our objective was to investigate the involvement of these cells in the inflammatory response associated to chronic lung disease. Methods: Human lung fibroblasts and airway epithelial cells were challenged with Interleukin-1ß and hypoxia, and with inhibitory (simvastatin) stimuli of the inflammatory response. Expression of markers of local inflammation ((IL-8, monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), factor-κB1 (NF-κB1)), systemic inflammation ((C-reactive protein (CRP) and serum amyloid A (SAA)) and proteases matrix metalloproteinase (MMP) 9 and 12 were assessed by PCR and ELISA. Apoptosis/necrosis was analyzed by flow cytometry. Results: Our results showed that the lung fibroblasts had a higher expression of local and systemic inflammation and protease activity markers when they were treated with IL-1ß compared to airway epithelial cells. Under hypoxic conditions, we observed a decrease in systemic inflammation in lung fibroblasts, which was further attenuated by simvastatin. Conclusion: The lung fibroblasts seem to be the main initially stimulated cells that could potentially trigger the inflammatory response, and be responsible for the eventual onset of chronic lung disease. The involvement of IL-1ß stimulation in systemic inflammatory and proteinase imbalance biomarkers is higher in lung fibroblasts. Apoptosis is not a predominant mechanism in these cells.

Differential biomarker profiles between unprovoked venous thromboembolism and cancer.

BACKGROUND: The relationship between cancer and venous thromboembolic disease (VTD) are complex because the activated coagulation factors are not only involved in thrombosis but also in malignant processes, such as angiogenesis and metastasis. OBJECTIVE: To compare phenotypes of extracellular vesicles (EVs), and levels of D-dimer, soluble P-selectin (sP-selectin) and antigenic tissue factor (TF) between unprovoked VTD patients, who did not develop cancer during one-year follow-up, and those with advanced stage of cancer but not associated with VTD. METHODS: A prospective study in which we included 138 unprovoked VTD patients and 67 advanced cancer patients, who did not develop thrombosis. Levels of EVs of different cellular origin (platelet, endothelium and leukocyte), EVs positive for tissue factor (TF) and P-selectin glycoprotein ligand 1 were quantified by flow cytometry. D-dimer, soluble P-selectin (sP-selectin) and antigenic TF were determined by ELISA. RESULTS: TF-positive EVs, D-dimer, and sP-selectin were markedly elevated in unprovoked VTD patients compared to cancer patients without association with thrombosis. CONCLUSIONS: Levels of TF-positive EVs, D-dimer and sP-selectin are able to discriminate between unprovoked VTD patients not related to cancer and cancer patients not associated with VTD. These results could lead to the application of EVs as biomarkers of both diseases. Key messages: Circulating EVs, specifically TF-positive EVs, in combination with plasmatic markers of hypercoagulable states, such as D-dimer, sP-selectin and antigen TF, are able to discriminate between cancer patients without thrombosis and patients with unprovoked VTD. Research fields could be opened. Future studies will assess if these biomarkers together serve as predicting thrombotic events in cancer populations.

Estudio de los niveles basales de survivina y otros marcadores para la predicción de los resultados de la pleurodesis con talco en derrames pleurales malignos / Study on the baseline levels of survivin and other markers to predict the results of pleurodesis with talc in malignant pleural effusions

La survivina se encuentra sobre-expresada en tumores, y podría ser un buen biomarcador diagnóstico y pronóstico en derrames pleurales malignos. OBJETIVO: estudiar la concentración de survivina en pacientes con derrame pleural maligno sometidos a pleurodesis con talco, relacionarla con el resultado de ésta y comparar sus resultados con otros marcadores como pH, glucosa y LDH en líquido pleural. MÉTODOS: se han incluido 84 pacientes con derrame pleural maligno (32 con cáncer de mama, 25 de pulmón y 27 mesoteliomas) sometidos a toracoscopia y pleurodesis con talco. Se recogieron muestras de líquido pleural antes (basal) y 24 horas después de la pleurodesis, y en ellas se midieron los niveles de survivina, pH, glucosa y LDH. También se estudió la carga tumoral en la pleura y la re-expansión del pulmón tras la toracoscopia y pleurodesis.R RESULTADOS: la presencia de niveles basales de survivina > 30 pg/mL se asoció a alto índice de fracaso de la pleurodesis (p = 0,002), y superó en poder predictivo a pH (p = 0,004), glucosa (p = 0,005) y LDH (p = 0,013) CONCLUSIÓN: la survivina juega un poderoso papel como marcador pronóstico en derrames pleurales malignos, y se suma a otros marcadores clásicos como pH, glucosa y LDH, que están asociados a la agresividad tumoral

Survivin is found to be overexpressed in tumors and could be a good diagnostic and prognostic biomarker in malignant pleural effusions. OBJECTIVE: To study the concentration of survivin in patients with a malignant pleural effusion who undergo pleurodesis with talc, associate it with the result of the procedure and compare the results with other markers like pH, glucose and LDH in pleural liquid. METHODS: 84 patients with malignant pleural effusion (32 with breast cancer, 25 lung cancer and 27 mesotheliomas) who underwent thoracoscopy and pleurodesis with talc were included in the study. Pleural liquid samples were taken before (baseline) and 24 hours after the pleurodesis, measuring the levels of survivin, pH, glucose and LDH. The tumor burden in the pleura and the re-expansion of the lung after thoracoscopy and pleurodesis were also studied. RESULTS: The presence of baseline levels of survivin >30 pg/mL was associated with a high rate of pleurodesis failure (p = 0.002) and surpassed the predictive power of pH (p = 0.004), glucose (p = 0.005) and LDH (p = 0.013). CONCLUSION: Survivin plays a powerful role as a prognostic marker in malignant pleural effusions and joins other classic markers like pH, glucose and LDH, which are associated with tumor aggression

Análisis de degradación de stents metálicos en modelo de cultivo "in vitro" con células epiteliales respiratorias y fibroblastos / Degradation analysis for metal stents in an in vitro cell culture model with respiratory epithelial cells and fibroblasts

Objetivo: investigar la posible degradación de stents metálicos tras co-cultivo con células respiratorias in vitro. Método: durante 21 días se han co-cultivado con la línea CRL-4011 (epitelial) y MRC-5 (fibroblastos) tres tipos de stents: Wallstent(R) (aleación de cobalto-cromo-níquel y molibdeno), Zilver PTX(R) y Zilver Flex(R) (nitinol, aleación de níquel-titanio, con y sin liberación de paclitaxel, respectivamente). Las mismas células sin stent sirvieron como control. Los sobrenadantes de los cultivos se recogieron los días 3, 9, 15 y 21, se alicuotaron y almacenaron a -800 C. Mediante espectrometría de masas (ICP/ MS) se investigaron los niveles de titanio, cromo, níquel, cobalto y molibdeno en los sobrenadantes, y también se han analizado los niveles de esos mismos elementos en el medio de cultivo original (antes de añadirlo a los cultivos celulares). Resultados: en todos los experimentos se encontraron mayores niveles de elementos metálicos en los sobrenadantes recogidos en el tercer día de cultivo, tanto de células epiteliales como de fibroblastos, con diferencias estadísticamente significativas (p<0,002). Los sobrenadantes de los cultivos de células epiteliales con Wallstent mostraron los niveles más altos de níquel y cobalto respecto a los controles (p = 0,001), y los niveles de titanio fueron más altos en los cultivos de Zilver Flex y PTX, constituidos por una aleación de níquel y titanio (p <0,001). Conclusiones: hemos detectado una rápida liberación en el sobrenadante de todos los cultivos de los elementos constitutivos de los tres stents que incluimos en los experimentos, y con niveles muy superiores a los cultivos controles

Objective: To investigate the possible degradation of metal stents after co-culture with respiratory cells in vitro. Methods: Three types of stents were co-cultured with the CRL-4011 line (epithelial) and the MRC-5 line (fibroblasts): Wallstent(R) (cobalt-chromium-nickelmolybdenum alloy), Zilver PTX(R) and Zilver Flex(R) (nitinol, nickel-titanium alloy, with and without paclitaxel release, respectively). The same stentless cells served as the control group. Culture supernatants were collected on days 3, 9, 15 and 21, aliquoted and stored at -80 ºC. The levels of titanium, chromium, nickel, cobalt and molybdenum in the supernatants were studied using inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS), and the levels of the same elements were also analyzed in the original culture medium (before adding them to the cell cultures). Results: In all experiments, higher levels of metal elements were found in the supernatants collected on the third day of culture, for both epithelial cells and fibroblasts, with statistically significant differences (p < 0.002). The supernatants of epithelial cell cultures with Wallstent showed the highest levels of nickel and cobalt in comparison to controls (p = 0.001), and titanium levels were higher in Zilver Flex and Zilver PTX cultures, consisting of a nickeltitanium alloy (p < 0.001). Conclusion: We have detected a rapid release in the supernatant of all the cultures of the constituent elements of the three stents that we included in the experiments, and with levels much higher than those of the control cultures

Mecanismos patogénicos en la fibrosis pulmonar idiopática. Implicación de los canales de aquoporina 1 (aqp1) / Pathogenic mechanisms in idiopathic pulmonary fibrosis. Involvement of aquoporin 1 (AQP1) channels

La fibrosis pulmonar idiopática (FPI) es una enfermedad pulmonar intersticial difusa (EPID) y progresiva. La FPI resulta de la alteración en la reepitelización tras la lesión de las células epiteliales alveolares. Se produce un aumento en la apoptosis epitelial y en la síntesis de mediadores profibróticos, con la consiguiente proliferación de fibroblastos, transformación a miofibrobastos y el depósito incontrolado de matriz extracelular. La aquoporina 1 (AQP1), es una proteína que facilita el movimiento de agua entre el espacio aéreo pulmonar y el parénquima y se ha demostrado que se regula al alza en animales expuestos a hipoxia. La AQP1 se expresa en células endoteliales, pero no en el epitelio alveolar pulmonar. Más recientemente se ha asociado a la AQP1 en los mecanismos implicados en la proliferación celular. Nuestro objetivo principal ha sido evaluar la participación de las Aquoporinas (AQPs) pulmonares en la patogenia de la FPI. Hemos analizado la expresión de AQP1 en biopsias de pacientes diagnosticados con FPI según los criterios de la ATS/ERS/ALAT de 2011 y en otras patologías pulmonares tales como la neumonitis por hipersensibilidad, sarcoidosis y biopsias de controles sanos. Los resultado de la inmunohistoquímica revelaron una intensa expresión de AQP1 en neumocitos tipo II hiperplásicos solo en las muestras obtenidas de pacientes con FPI. Además hay una inducción de la expresión de AQP1 (mRNA y proteína) tras la estimulación con TGF-ß lo que acompaña a los cambios típicos del proceso de transición epitelio mesenquimal. Por lo tanto, la aparición de AQP1 en las células hiperplásicas tipo II y su regulación podrían estar implicadas en la patogénesis de la FPI

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a diffuse interstitial lung disease (ILD) that is progressive. IPF results from altered re-epithelialization after injury to alveolar epithelial cells. There is an increase in epithelial apoptosis and synthesis of pro-fibrotic mediators, with consequent proliferation of fibroblasts, transformation into myofibroblasts and uncontrolled deposition of extracellular matrix. Aquoporin 1 (AQP1) is a protein that facilitates the movement of water between the pulmonary airspace and the parenchyma and has been shown to be upregulated in animals exposed to hypoxia. AQP1 is expressed in endothelial cells, but not in the pulmonary alveolar epithelium. More recently, AQP1 has been associated in the mechanisms involved in cell proliferation. Our primary objective has been to assess the participation of lung aquoporins (AQPs) in the pathogenesis of IPF. We have analyzed the expression of AQP1 in biopsies of patients diagnosed with IPF according to the ATS/ERS/ALAT 2011 criteria and in other lung diseases such as hypersensitivity pneumonitis, sarcoidosis and biopsies of healthy controls. Immunohistochemistry results revealed an intense expression of AQP1 in Type II pneumocyte hyperplasia only in samples obtained from patients with IPF. Additionally, AQP1 (mRNA and protein) expression is induced after stimulation with TGFß, which accompanies typical changes in the mesenchymalepithelial transition process. Therefore, the appearance of AQP1 in Type II cell hyperplasia and its regulation could be involved in the pathogenesis of IPF

La arteria pulmonar es el principal productor de reactantes de fase aguda en pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica / The pulmonary artery is the main producer of acute phase reactants in patients with chronic obstructive pulmonary disease

INTRODUCCIÓN: El origen de la inflamación sistémica en la EPOC sigue estando poco aclarada. Hemos tratado de comparar la expresión de los niveles de reactantes de fase aguda en pacientes con EPOC y los fumadores sanos (controles), tanto en las arterias pulmonares locales como en leucocitos de sangre periférica y plasma. MÉTODO: Los pacientes se clasificaron como EPOC o fumadores sanos según los resultados de la espirometría. Las arterias pulmonares, leucocitos de sangre periférica y las muestras de plasma se obtuvieron de todos los sujetos incluidos. La expresión génica de la proteína C-reactiva (PCR) y el amiloide sérico A (AAS1, AAS2, y AAS4) se evaluó en muestras de tejidos y leucocitos de sangre periférica mediante RT-PCR. Los niveles de PCR y AAS se midieron mediante ensayos inmunoenzimáticos. RESULTADOS: Se incluyeron un total de 40 pacientes con EPOC y 62 fumadores sanos, reclutados desde comienzos del año 2011 hasta finales del 2012. Tanto PCR y AAS se sobreexpresa en la arteria pulmonar en comparación con los leucocitos de sangre periférica. En los pacientes con EPOC, en la arteria pulmonar, los niveles de expresión génica de la PCR, el AAS1, y el AAS2 fueron 8-, 56-, y 2,3 veces mayor que en los leucocitos de sangre periférica, respectivamente. No se observó correlación entre los niveles plasmáticos de marcadores inflamatorios y su expresión en la arteria pulmonar y leucocitos de sangre periférica. CONCLUSIONES: La sobreexpresión de AAS en las arterias pulmonares en comparación con los leucocitos de sangre periférica sugiere que el pulmón puede ser la principal fuente de AAS en pacientes con EPOC. Otras fuentes potenciales de inflamación sistémica en la EPOC (por ejemplo, el hígado) necesitan un examen más detallado

INTRODUCTION: The origin of systemic inflammation in COPD is still not completely clear. We have attempted to compare the expression levels of acute phase reactants in patients with COPD and healthy smokers (controls), both in the local pulmonary artery and in peripheral blood leukocytes and plasma. METHOD: Patients were classified as having COPD or being healthy smokers according to spirometry results. The pulmonary artery, peripheral blood leukocyte and plasma samples were obtained from all included subjects. Genetic expression of the C-reactive protein (CRP) and serum amyloid A (SAA1, SAA2 and SAA4) was evaluated in tissue samples and peripheral blood leukocytes using RT-CRP. CRP and SAA levels were measured using immunoenzymatic assays. RESULTS: A total of 40 patients with COPD and 62 healthy smokers were included, recruited between early 2011 and late 2012. Both CRP and SAA was overexpressed in the pulmonary artery in comparison with peripheral blood leukocytes. In patients with COPD, genetic expression levels of CRP, SAA1 and SAA2 in the pulmonary artery were 8, 56, and 2.3 times higher than in peripheral blood leukocytes, respectively. No correlation was observed between inflammatory marker plasma levels and their expression in the pulmonary artery and peripheral blood leukocytes. CONCLUSIONS: The overexpression of SAA in pulmonary arteries in comparison with peripheral blood leukocytes suggests that the lung may be the main source of SAA in patients with COPD. Other potential sources of systemic inflammation in COPD (for example, the liver) require more detailed examination

Estudio en fibroblastos humanos del sistema angiotensina en la fisiopatología de la fibrosis pulmonar idiopática / The study of angiotensin system human fibroblasts in the physiopathology of idiopathic pulmonary fibrosis

En el tejido pulmonar de modelos murinos, la angiotensina II induce la proliferación de fibroblastos, su diferenciación a miofibroblastos y la producción de procolágeno tras su unión al receptor I de la angiotensina. Hemos estudiado el comportamiento de fibroblastos pulmonares humanos procedentes de una línea celular comercial tras la estimulación con TGF-β1. Hemos observado que estos fibroblastos, cuando son estimulados, aumentan la expresión de bFGF, colágeno y α-SMA. Tras el bloqueo del receptor de Angiotensina II con Losartan a una concentración de 10 µM y la estimulación con TGF- β1, se produce una disminución, tanto de los niveles de bFGF como de la concentración de colágeno, sin que llegue a alcanzar la significación estadística con respecto a las células no tratadas. En cuanto a la expresión de α-SMA como marcador de transformación a miofibroblastos, no había diferencias entre las células tratadas con TGF-β1 y TGF-β1 más losartán

In murine model lung tissue, angiotensin II induces the proliferation of fibroblasts, their distinction from myofibroblasts and procollagen production after its binding with the type 1 receptor. We have studied the behavior of human lung fibroblasts from a commercial cell line after stimulation with TGF-β1. We observed that those fibroblasts, when stimulated, increased bFGF, collagen and α-SMA expression. After blocking the angiotensin II receptor with losartan at a concentration of 10 µM and stimulation with TGF- β1, there was a decrease in both bFGF levels and collagen concentration, without reaching statistical significance with regard to untreated cells. With regard to α-SMA expression as an indicator of transformation to myofibroblasts, there were no differences between cells treated with TGF-β1 and TGF-β1 with losartan

Comparacion de un nuevo agente basado en nanotecnología con el talco convencional para el control de los derrames pleurales malignos / Comparison between a new nanotechnology-based agent and conventional talc in the control of malignant pleural effusions

En este trabajo usamos dióxido de titanio (TiO2), fabricado mediante nanotecnología. Para demostrar su superioridad respecto al talco, realizamos un estudio in vitro comparando la respuesta pro-inflamatoria de ambos agentes sobre células malignas y mesoteliales benignas; investigando la posible inducción de apoptosis y la posible inhibición de angiogénesis también por ambos agentes. Realizamos cultivo de líneas celulares derivadas de mesotelio humano, procedente de mesotelioma bifásico humano y adenocarcinoma bronquial humano. Las células se co-cultivaron con diferentes dosis de talco y de nanopartículas de TiO2. En todas las muestras de sobrenadantes de los cultivos se analizaron los niveles de diferentes mediadores inflamatorios. La tasa de apoptosis se analizó por la expresión de Caspasa-3. Para el estudio de angiostasis se determinaron los niveles de endostatina mediante técnica ELISA. Observamos que la viabilidad de las células mesoteliales benignas es mucho menor al emplear TiO2. En el caso de las células mesoteliales malignas, se observó el mismo efecto con dosis alta de TiO2. En el adenocarcinoma de pulmón, la viabilidad de estas células expuestas al talco fue netamente inferior a la que se observó en la línea celular benigna. La producción de IL-8 fue mucho mayor por parte de las células mesoteliales neoplásicas que por las benignas y aumentó siguiendo un patrón dosis dependiente frente al talco, mientras que cayó con el TiO2. Según estos resultados, se demuestra que el talco es superior al TiO2 en su capacidad de producir mediadores que favorecerían la pleurodesis para el control del derrame pleural maligno

For this study, we used titanium dioxide (TiO2), produced using nanotechnology. To show its superiority with respect to talc, we completed an in vitro study comparing the pro-inflammatory response of both agents towards malignant and benign mesothelial cells; researching the possible apoptosis induction and possible inhibition of angiogenesis for both agents. We took a culture of cell lines derived from human mesothelioma, originating from human biphasic mesothelioma and human bronchial adenocarcinoma. The cells were cocultured with different doses of talc and TiO2 nanoparticles. The levels of different inflammatory mediators were analyzed for each culture supernatant sample. The apoptosis rate was analyzed using caspase-3 expression. The endostatin levels were determined for the angiostasis study using the ELISA technique. We observed that the viability of the benign mesothelial cells is much lower after using TiO2. In the case of malignant mesothelial cells, the same effect was observed with a high dose of TiO2. In adenocarcinoma of the lung, the viability of these cells exposed to talc was distinctly lower than that which was observed in the benign cell line. IL-8 production was much higher in neoplastic mesothelial cells than in benign cells and increased following a dose-dependent pattern with talc, while it decreased with TiO2. According to these results, we can see that talc is superior to TiO2 in its ability to produce mediators which favor pleurodesis for the control of malignant pleural effusions

Origen celular de micropartículas circulantes en pacientes con enfermedad tromboembólica venosa y cáncer / Celular origin of circulating microparticles in patients with venous thromboembolism and cancer

Las micropartículas (MPs) son unas vesículas extracelulares consideradas potentes efectores celulares. Están presentes en individuos sanos y se encuentran elevadas en estados patológicos como enfermedades inflamatorias, neoplásicas y trombosis. La relación entre enfermedad tromboembólica venosa (ETV) y cáncer está bien establecida. Se piensa que las MPs serían una conexión patogénica entre ambas entidades. De confirmarse, podrían utilizarse como biomarcadores. Nuestro objetivo fue caracterizar las MPs en ambas patologías atendiendo a su origen celular (celular, endotelial, plaquetar, leucocitario y las que exhibían en su superficie mucina 1). También se estudiaron parámetros funcionales como el dímero D (DD) y la P-selectina soluble (sPS). Se consideraron 96 pacientes con ETV idiopática y 85 con neoplasias avanzadas de pulmón, gástrico o páncreas. A todos ellos se les realizó un seguimiento clínico de dos años en el que se excluyeron del estudio aquellos que fueron diagnosticados de cáncer en el grupo de ETV o que desarrollaron trombosis en el grupo de pacientes neoplásicos. Finalmente, se analizaron 82 pacientes con ETV y 68 con cáncer. En nuestros resultados encontramos que las MPs totales y las MPs de origen plaquetar diferenciaban ambos grupos de pacientes. Además, se determinaron cifras significativamente mayores de DD y sPS (p <0,001) en el grupo de ETV. Las diferencias encontradas entre ambos grupos, teniendo en cuenta el origen de las MPs, podrían estar causadas por las características protrombóticas del grupo neoplásico y por el secuestro de las mismas dentro de los coágulos activos en el grupo de ETV

Microparticles (MPs) are extracellular vesicles considered to be powerful cellular effectors. They are present in healthy individuals and are elevated in pathological conditions such as inflammatory and neoplastic diseases, and thrombosis. The relationship between venous thromboembolism (VTE) and cancer has been well established. MPs are thought to be a pathogenic connection between the two entities. If confirmed, they could be used as biomarkers. Our aim was to characterize the MPs in both diseases according to their cellular origin (cellular, endothelial, platelet, leukocyte and those that exhibited mucin 1 on their surface). Functional parameters such as D-dimer (DD) and soluble P-selectin (sPsel) were also studied. 96 patients with idiopathic VTE and 85 with advanced lung, stomach or pancreatic neoplasia were considered. All of them were followed clinically for two years and those who were diagnosed with cancer in the VTE group or those who developed thrombosis in the group of neoplastic patients were excluded from the study. Finally, 82 VTE patients and 68 cancer patients were analyzed. In our results, we found that total MPs and platelet-derived MPs differentiated both patient groups. Additionally, significantly greater numbers of DD and sPsel (p <0.001) were determined in the VTE group. The differences found between both groups, taking into account the origin of the MPs, could be caused by the prothrombotic characteristics of the neoplastic group and their sequestration within active clots in the VTE group

Interacciones entre stents metálicos desnudos y liberadores de droga con fibroblastos respiratorios co-cultivados in vitro / Interactions between bare metal and drug eluting stents co-cultivated with respiratory fibroblasts in vitro

OBJETIVO: testar una línea de fibroblastos (MRC-5) frente a distintos tipos de stents metálicos, desnudos o con liberación de droga. MÉTODOS: co-cultivamos durante tres semanas dos stents metálicos desnudos (Zilver Flex(R), aleación de níquel-titanio, niti-nol) y Wallstent(R) (aleación de cobalto), y otros tres liberadores de paclitaxel o everolimus: Zilver PTX(R) (nitinol con 3 μg/mm2 paclitaxel), Taxus Liberté(R) (acero 316-L con 1 μg/mm2 paclitaxel) y Promus(R) (aleación de cromo-cobalto con evero-limus). Se determinaron los niveles de interleuquina 8 (IL-8), factor básico de crecimiento de fibroblastos (bFGF), factor de crecimiento vascular endotelial (VEGF), y TGF-β1 (Transfor-ming growth factor-beta). RESULTADOS: se observó gran proliferación celular alrededor de los stents desnudos (Zilver Flex(R) y Wallstent(R)), aunque con distinto ritmo en el crecimiento (más tardío y más intenso en el stent de nitinol, comparado con el de cobalto), mientras que la celularidad decreció rápidamente en los stents liberadores de droga, especialmente en el Zilver PTX(R), comparado con Taxus Liberté(R). Tras un crecimiento inicial relativamente lento, la celularidad se recuperó en el Promus(R), el cual destacó por sus altos niveles de IL-8 y de TGF-β1 en fases precoces. El Taxus Liberté(R)también indujo producción marcada de IL-8 in vitro. En conclusión, ninguno de los stents que hemos testado en el presente estudio sería suficientemente seguro para prevenir su encapsulación fibrótica, aunque el stent de nitinol desnudo sería, por el momento, el menos agresivo en este sentido

OBJECTIVE: test a line of fibroblasts (MRC-5) against different types of bare metal or drug eluting stents. METHODS: we co-cultivated two bare metal stents for three weeks (Zilver Flex(R), nickel-titanium alloy, shape-memory alloy) and Wallstent(R) (cobalt alloy), and other three paclitaxel-eluting or everolimus-eluting stents: Zilver PTX(R) (shape-me-mory alloy with 3 μg/mm2 paclitaxel), Taxus Liberté(R) (steel 316-L with 1 μg/mm2 paclitaxel) and Promus(R) (chromium-cobalt alloy with everolimus). The levels of interleukin-8 (IL-8), basic fibroblast growth factor (bFGF), vascular en-dothelial growth factor (VEGF), and TGF-β1 (Transforming growth factor-beta) were determined.RESULTS: a large proliferation of cells was observed around the bare stents (Zilver Flex(R) and Wallstent(R)), although with different speeds of growth (slower and more intense with the shape-memory nitinol alloy stent, compared with that of cobalt), while the number of cells decreased rapidly with the drug eluting stents, especially the Zilver PTX(R), compared with Taxus Liberté(R). After a relatively slow initial growth, the number of cells recovered in the Promus(R), which stood out in association with its high levels of IL-8 and of TGF-β1 in early phases. The Taxus Liberté(R) also induced a marked pro-duction of IL-8 in vitro. In conclusion, none of the stents we tested in this study would be sufficiently safe to prevent their fibrotic encapsulation, although the bare shape-memory alloy stent (nitinol) would, for the time being, be the least aggressive in this regard

Expresión de aquaporinas en tejido pulmonar de pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica / Aquaporin expression in the lung tissue of copd patients

INTRODUCCIÓN: Estudio de la expresión de aquaporinas (AQP1 y AQP5) en el tejido bronquial y parénquima pulmo-nar de pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva cróni-ca (EPOC) y fumadores sin la enfermedad. MÉTODO: Utilizando un diseño caso-control, se seleccionó un grupo de 15 pacientes con EPOC (93,3% varones, con una edad media de 68 años, una media de FEV1 del 72% y 26,7% con corticosteroides inhalados) y 15 fumadores sin la enfermedad, a los cuales se les sometió a cirugía de resección pulmonar por neoplasia pulmonar. Se estudió la expresión de AQP1 y AQP5 en el tejido bronquial y en parénquima pulmo-nar mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real.RESULTADOS: No encontramos diferencias en la expresión génica de estas AQPs en ambos territorios pulmonares entre los pacientes con EPOC y los fumadores sin la enfermedad. Sin embargo, en los pacientes EPOC, la expresión de AQP1 era 2,41 veces mayor en el parénquima comparado con los controles, mientras que la AQP5 mostraba un patrón inverso, con 7,75 veces mayor expresión en el tejido bronquial de los sujetos control.CONCLUSIÓN: Los resultados del presente trabajo proporcio-nan evidencia inicial respecto a la expresión de AQP1 y AQP5 en pacientes con EPOC

INTRODUCTION: Study of aquaporin expression (AQP1 and AQP5) in the bronchial tissue and lung parenchyma of pa-tients with chronic obstructive pulmonary disease (COPD) and smokers without the disease. METHOD: Using a case-control design, a group of 15 patients with COPD was selected (93.3% males, with an average age of 68 years, an average FEV1 of 72% and 26.7% with inha-led corticosteroids) and 15 smokers without the disease, who underwent lung resection surgery due to lung neoplasm. The expression of AQP1 and AQP5 in the bronchial tissue and in lung parenchyma was studied using real-time polymerase chain reaction (PCR). RESULTS: No differences were found in the gene expression of these AQPs in either lung territories between the patients with COPD and the smokers without the disease. Nevertheless, in the COPD patients, the expression of AQP1 was 2.41 times greater in the parenchyma compared with the controls, while the AQP5 showed an inverse pattern, with 7.75 times greater expression in the bronchial tissue of the control subject. CONCLUSION: The results of this study provide initial evidence regarding the expression of AQP1 and AQP5 in patient with COPD

Estudio de la asociación de los polimorfismos de laglutation -S-transferasa y la enfermedad pulmonar obstructiva crónica en la raza caucásica / Study of the association of polymorphisms of glutathione-s-transferase and chronic obstructive pulmonary disease in caucasians

Introducción: Diversos estudios previos han encontrado una asociación no consistente entre los polimorfismos de la Glutation-S-transferasa (GST) y la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), con una asociación diferente según el área geográfica estudiada a nivel mundial. El objetivo del presente trabajo fue estudiar esa relación en una muestra caucásica española. Método: Estudio observacional analítico de casos-control en el que se incluyeron pacientes con EPOC y sujetos fumadores sin la enfermedad. A cada sujeto incluido se le recogieron sus datos sociodemográficos y clínicos mediantes un cuestionario estandarizado y se les extrajo una muestra de sangre para el estudio de los polimorfismos GSTP1 Ile105Val (A131G) Exon5, GSTP1 Ala114Val exón 6, GSTM1 de elección y GGSTT1delección.Resultados: La muestra estaba compuesta por 143 casos (64años, FEV1 69%) y 55 controles. El polimorfismo más asociado fue el GSTT que en el análisis bivariante se acercó a la significación estadística, alcanzándola en el análisis de regresión ajustado por sexo, paquetes-año e IMC (p = 0,031). El análisis (..) (AU)

Introduction: Various previous studies have found a non consistent association between polymorphisms of Glutathione-S-transferase (GST) and chronic obstructive pulmonary disease (COPD), with a different association according to the geographic area studied at global level. The objective of the present work was to study that relationship in a Spanish Caucasian sample. Method: Analytical observational case-control study including patients with COPD and smokers without the disease. Socio-demographic and clinical data were recorded by means of a standardized questionnaire, and a blood sample extracted from each participant for the study of the polymorphisms (..) (AU)

Producción de factor básico de crecimiento de fibroblastos (Beta-fgf) trasla estimulación de fibroblastos pulmonares humanos in vitro confactor transformador del crecimiento Beta1 (tGf-Beta1). Estudio dosis respuesta / The production of basic fibroblast growth factor following in vitro stimulation of human lung fibroblasts with transforming growth factor Beta1: Dose response Study

Objetivo: Establecer cuál es la dosis de TGF-β1 más adecuada para la estimulación de cultivos de fibroblastos pulmonares humanos y el tiempo necesario de incubación de los mismos para obtener la máxima respuesta. Material y métodos: Diseñamos un estudio de dosis respuesta con TGF-β1 sobre una línea celular de fibroblastos pulmonares humanos. Analizamos la producción de factor básico de crecimiento de fibroblastos (b-FGF) como marcador de estímulo fibrogénico. Para ello se cultivaron fibroblastos humanos procedentes de una línea celular (MRC5) obtenida de la ECCC (European Collection of Cell Culture, UK). Las células se cultivaron en placas de 33cm2, cuando estuvieron confluentes se les estimuló con diferentes dosis de TGF-β1 (Peprotech, USA): 5, 10 ng/ml. Las células se incubaron durante 12, 24, 48 y 72 horas. Se usaron como control células no estimuladas con TGF-β1. Los niveles de factor básico de crecimiento de fibroblastos (b-FGF) se midieron por ELISA (R&D System, Minneapolis, MN). Se analizó la viabilidad celular mediante Azul Trypan a las 24, 48 y 72 horas de la estimulación con TGF-β1. Resultados: La mayor producción de b-FGF se produjo a las 24 horas tras la estimulación con la dosis de 10 ng/ml de TGF-β1, siendo la producción de b-FGF igual a 501 pg/ml. La viabilidad celular tiene su mayor valor a las 48 horas, disminuyendo en horas sucesivas, alcanzando los niveles más bajos a las 72 horas. Conclusiones: Existe un efecto estimulador del TGF-β1 sobre los fibroblastos pulmonares humanos in vitro. Esta acción del TGF-β1 es dosis dependiente y alcanza el nivel máximo de proliferación con la dosis de 10 ng/ml a las 24 horas de su tratamiento (AU)

Objective: To establish the most appropriate dose of TGF-β1 to stimulate human lung fibroblasts cultures and their necessary incubation time to obtain the maximum response. Material and methods: A dose response study was designed with TGF - β1 based on human lung fibroblast cells. The production of basic fibroblast growth factor (b-FGF) was analyzed as a marker for fibrogenic stimulus. Human fibroblasts from a cell line (MRC5) were obtained from the ECCC (European Collection of Cell Culture, UK) and cultivated. Cells were cultured on 33 cm2 plates; once confluent, they were stimulated with various doses of TGF - β1 (Peprotech, USA): 5, 10 ng/ml. The cells were incubated for 12, 24, 48 and 72 hours. Cells not stimulated with TGF - β1 were used as a control. The levels of basic fibroblast growth factor (b-FGF) were measured using ELISA (R&D System, Minneapolis, MN). Cell viability was analyzed using Trypan Blue at 24, 48 and 72 hours following the stimulation with TGF - β1. Results: The greatest production of b-FGF took place 24 hours after the stimulation with the dose of 10ng/ml of TGF - β1, with the production of b-FGF being equal to 501 pg/ml. The cell viability reached its greatest value at the 48 hours, decreasing in the hours thereafter, to reach the lowest levels at 72 hours. Conclusions: TGF-β1 has a stimulating effect on human lugn fibroblasts in vitro. This action of the TGF - β1 is dose dependent and reaches maximum proliferation levels with a dose of 10ng/ml 24 hours following treatment (AU)

Niveles séricos de mesotelina. Valor pronóstico en mesotelioma pleural maligno / Serum levels of mesothelin. Prognosis value in malignant pleural mesothelioma

El mesotelioma pleural maligno (MPM) es un tumor agresivo que surge del epitelio pleural. Se han detectado concentraciones aumentadas de proteínas solubles relacionadas con la mesotelina (SMRP) en suero de pacientes con MPM (..) (AU)

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is an aggressive tumour that arises from pleural epithelium. Increased concentrations of soluble mesothelin related proteins (SMRP)

Interleukin-8 activates coagulation and correlates with survival after talc pleurodesis.

The aim of our study was to investigate whether interleukin (IL)-8 activates systemic coagulation after talc pleurodesis in malignant pleural effusion (MPE), and whether levels of IL-8 in plasma are related to early death after talc pleurodesis. IL-8 and tumour necrosis factor (TNF)-alpha were measured in samples from 231 MPE patients before and after talc pleurodesis. Whole blood from 31 healthy volunteers was incubated with IL-8, TNF-alpha and thromboplastin for 3 h in vitro, and thrombin-antithrombin (TAT) levels were measured. The same stimulation of blood samples was repeated using doses of calibrated talc. Nine, 12 and 17 patients died within 7, 10 and 15 days respectively. IL-8 was elevated in 102 patients within 48 h, and thrombotic events were observed in six of those patients. Survival correlated inversely with IL-8 at 24 and 48 h, and a significant correlation was also found between IL-8 and TAT. A positive dose-dependent correlation with TAT production was observed when blood was stimulated with IL-8 in vitro. However, there was no significant response to stimulation with talc, as compared with control blood samples. IL-8 is involved in the activation of coagulation that may occur after talc pleurodesis, and might also be implicated in early death of patients with MPE.

Valor pronóstico de determinados marcadores biológicos en la supervivencia global y la respuesta al tratamiento del cáncer de mama con metástasis pleurales / Prognostic value of specific biological markers in the global survival rate and response to treatment of breast cancer with pleural metastasis

Objetivo: 1. Estudiar qué tipo de marcadores biológicos tienen valor pronóstico en la supervivencia global y la respuesta al tratamiento en el cáncer de mama, a partir del descubrimiento de metástasis pleurales. 2. Examinar la influencia de la aplicación de talco intrapleural. 3. Establecer un esquema de abordaje terapéutico en base a los diferentes factores pronósticos. Pacientes y métodos: estudiamos una serie de 126 pacientes con cáncer de mama y afectación pleural metastásica. Se examinaron exhaustivamente los factores clásicos del cáncer de mama. Así mismo se calcularon el intervalo libre de enfermedad (ILE), el intervalo entre la aparición del derrame pleural y el abordaje toracoscópico del mismo, el intervalo entre la realización de la pleurodesis con talco y el exitus y el intervalo desde el diagnóstico del tumor primario hasta el exitus. Los factores biológicos (polimorfismos)fueron estudiados a partir del ADN de muestras de sangre periférica o líquido pleural crio conservado. Resultados: el derrame pleural era en el 77% de los casos la primera manifestación de recidiva de la enfermedad. El intervalo libre de enfermedad (ILE) fue de 57,9 meses (13,6-83,3). La supervivencia(expresada como mediana) desde el momento del diagnóstico del tumor primario fue de 77,5 meses (0,83-384). La media de seguimiento tras el talcaje fue de 14,6 meses. Encontramos correlación entre la edad temprana de presentación del cáncer de mama (..) (AU)

Objective: 1. To study what type of biological markers have prognostic value in the global survival rate and response to treatment of breast cancer, regarding discovery of pleural metastases. 2. To examine the influence of the application of intrapleural talc. 3. To establish a therapeutic approach outline based on the different prognosticfactors. Patients and methods: we studied a series of 126 patients with breast cancer and pleural metastasis. The classic factors of breast cancer were thoroughly examined. Also, we calculated the disease-free interval(DFI), the interval between the appearance of the pleural effusion and its thoracoscopic approach, the interval between pleurodesis with talc and death and the interval between the diagnosis of the first tumour and death. The biological factors (polymorphisms) were studied starting with the DNA of peripheral blood samples or cryopreservation of pleural liquid samples. Results: the pleural effusion was the first manifestation of a relapse of the disease in 77% of the cases. The disease-free interval (DFI) was57.9 months (13.6-83.3). The survival rate (expressed as median)from the diagnosis of the first tumour was 77.5 months (0.83-384).The average follow-up after the application of talc was 14.6 months. We found a correlation between the appearance of breast cancer(p=0.003) at a young age and the presence of the A2/A2 allele(homozygote of the CYP-17).Conclusions: the ideal profile for candidates for pleurodesis is those patients with an age >50 years, long DFI, short interval of time between the appearance of the pleural effusion and the application oftalc, absence of other metastasis at the time of thoracoscopy, positive ER (estrogen receptors) and PR (progesterone receptors) and a percentage of lymph nodes infiltrated/extracted less than 50%. The presence of mutated GSTM1 will be related with a more effective (..) (AU)

Importancia de los polimorfismos de la ciclooxigenasa-2 en la presentación clínica de la sarcoidosis / Importance of cyclooxigenase-2 polymorphismsin the clinical presentation of sarcoidosis

OBJETIVO: Estudiar la posible relación entre las manifestaciones clínicas de la sarcoidosis y los polimorfismos del gen de laciclooxigenasa-2 (COX-2).MÉTODO: Estudio multicéntrico observacional transversal en el que participaron 7 hospitales de España. Se incluyeron pacientes diagnosticados de sarcoidosis según criterios internacionales. De cada caso se recogió edad, sexo, método diagnóstico, enzima convertidora de angiotensina, pruebas de función respiratoria, estadio radiológico y clínica del paciente en el momento del diagnóstico. Los hallazgos clínicos se agruparon en respiratorios y sistémicos. Los estudios genéticos se realizaron a partir del ADN obtenido de linfocitos de sangre periférica. El ADN se amplificó mediante PCR convencional y los polimorfismos fueron analizados por sondas de hibridación fluorescentes y curvas de disociación. Se determinaron4 variantes alélicas del gen de la COX-2: COX2.5909T>G,COX2.8473T>C, COX2.926G>C y COX2.3050G>C. RESULTADOS: La muestra se compuso de 131 casos de sarcoidosis (63 hombres; edad: 47 ± 15 años), todos con diagnóstico histológico menos 5 casos. El polimorfismo COX2.3050G>C en homocigosis resultó estar significativamente presente entre los pacientes con manifestaciones sistémicas frente al resto de pacientes (4,6% vs 0%;p=0,045). La presencia de manifestaciones sistémicas de la enfermedad estuvo significativamente asociada a los pacientes portadores del alelo C de dicho polimorfismo (34,4% vs. 18,6%; p=0,031; OR:2,3; IC 95%: 1,03-5,12). El resto de polimorfismos estudiados no estuvieron relacionados con la expresión clínica de la enfermedad. CONCLUSIÓN: La presencia de manifestaciones sistémicas parece estar relacionada con los portadores del alelo C del polimorfismoCOX2.3050G>C de la COX-2 (AU)

OBJECTIVE: To study clinical manifestations of sarcoidosis according to cyclooxigenase-2 (COX-2) polymorphisms. METHOD: Observational cross-sectional multicentre trial in which 7 Spanish hospitals participated. Patients diagnosed withs arcoidosis according to international criteria were included. Age, gender, diagnostic method, angiontens in converting enzyme, pulmonary function tests, radiological stage and clinical findings at the moment of the diagnosis were recorded for each case included. Clinical findings were grouped as respiratory or systemic. Genetic studies were performed on DNA extracted from peripheral blood lymphocytes. DNA was amplified by conventional PCR and polymorphisms were studied by Fluorescent Hybridization Probe-Melting Curves. COX-2 polymorphisms genotyped were COX2.5909T>G, COX2.8473 T>C, COX2.926 G>C y COX2.3050 G>C.RESULTS: 131 sarcoidosis patients (63 males, age: 47 ± 15years) were included. All included patients had a histological diagnosis except for 5 patients. COX2.3050G>C homozygote polymorphism resulted to be significantly present in patients with a systemic manifestation of the disease as compared with the rest of the sample(4,6% vs 0%; p = 0,045). Systemic manifestations were significantly associated with allele C carriers of this polymorphism (34.4% vs.18.6%; p = 0.031; OR: 2.3; IC 95%: 1.03 – 5.12). The rest of the studied polymorphisms were not significantly related to the clinical manifestations of the disease. CONCLUSION: Our results suggest that allele C carriers ofCOX2.3050G>C polymorphism are associated with the systemic manifestations of sarcoidosis (AU)

Association of the 3050G>C polymorphism in the cyclooxygenase 2 gene with systemic sarcoidosis.

BACKGROUND: We investigated the potential association between cyclooxygenase-2 (COX-2) gene polymorphisms and clinical manifestations of sarcoidosis. METHODS: This observational cross-sectional study involved seven hospitals in Spain. We diagnosed patients with sarcoidosis according to the International Criteria. The following variables were recorded: age, gender, initial diagnostic methods, serum angiotensin-converting enzyme (ACE) levels, pulmonary function tests, radiological stage, and clinical findings at diagnosis. Manifestations of sarcoidosis were classified as systemic vs. nonsystemic. Genotyping of four COX-2 polymorphisms (COX2.5909T>G, COX2.8473T>C, COX2.926G>C, and COX2.3050G>C) was undertaken on DNA extracted from peripheral blood lymphocytes using fluorescent hybridization probes and melting curves. RESULTS: A total of 131 sarcoid patients (63 males, mean age: 47 +/- 15 years) were studied. One hundred twenty-six of these patients had one or more positive biopsies. The results demonstrated that genotype distribution for the COX2.3050G>C polymorphism was significantly different between patients with systemic sarcoidosis and those with nonsystemic forms (p = 0.046). After adjustment for age, gender, and serum ACE levels, a significant association between the carriage of at least one C allele of the COX2.3050G>C polymorphism and systemic sarcoidosis was observed (odds ratio [OR]: 2.3; 95% confidence interval [CI]: 1.03-5.12, p = 0.031). Other polymorphisms were not associated with either clinical manifestations of the disease or serum ACE levels. CONCLUSIONS: Our results indicate for the first time that the C allele of the COX2.3050G>C polymorphism is associated with systemic sarcoidosis.